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2016．05
液態活檢技術之血漿游離循環腫瘤DNA（ctDNA）
液體活檢是相對於組織活檢而言，利用高通量測序來測定人體血液中的腫瘤細胞或游離的DNA片段。液體活檢在腫瘤早篩、腫瘤用藥、療效評估和復發監測方面的研究進展無不讓大家拍手叫好。
正常細胞和腫瘤細胞都會破裂，細胞破裂之後，細胞中的DNA就會被釋放到體液當中，其中進入血液的這部分DNA，就被稱為血漿游離DNA，或者cell free DNA，簡稱 cfDNA。
cfDNA 裡來源於腫瘤細胞的那部分DNA，攜帶腫瘤特異突變，叫循環腫瘤DNA，或者circulating tumor DNA，簡稱ctDNA。
ctDNA測序的臨床意義
它可以減少病人開刀的痛苦，只需要抽血，不必開刀就可以做檢測。同時因為它只要抽血（而不必開刀），所以取樣方便，可以應用於腫瘤病人的病情隨訪，並可以多次取樣。抽管血就知道這個病人的腫瘤突變信息，從而指導臨床用藥。
ctDNA測序的難點
首先由於ctDNA的含量低，只佔cfDNA很小的比例，大約是幾萬分之一到千分之一。而且不同的病人，ctDNA含量差別很大，一般來說，癌症越晚期的病人，ctDNA的比例越高。
其次是血液中的游離DNA量很少，大約每一毫升的血漿中，只有十幾納克（ng）的游離DNA.
ctDNA檢測技術
- 腫瘤實時監測，以ctDNA作為腫瘤標誌物，通過多次取樣測序監測腫瘤負荷，反應藥物療效信息等。
- 腫瘤進化、耐藥，取治療前後的血漿樣本，通過ctDNA測序鑑定藥物治療過程中產生的耐藥突變。
- 復發風險預測，檢測手術後的ctDNA，根據是否能檢測到突變以及ctDNA豐度變化預測復發的風險。
一般而言，目前的ctDNA項目研究經驗，使用血漿DNA提取專用試劑盒QIAGEN, QIAamp Circulating Nucleic Acid kit提取cfDNA，採用Agilent SureSelectXT Custom捕獲目標區域，並採用 illumina HiSeq 4000 PE150平台測序，通過生物資訊分析找到血漿DNA的腫瘤突變標誌物。
