09 2021．12

【博士案件Book分享】如何挑選適當的脫鈣液?

你知道在做石蠟切片時，要是遇到含鈣的檢體，而脫鈣是不可忽略的步驟嗎?市面上就有許多種類的脫鈣液可以選擇，這些種類脫鈣液成了之後染色結果好壞至關重要的一環。

在病理實驗製作切片時，經常碰到一些含鈣組織，而鈣十分堅硬，由於組織中的鈣和石蠟之間的密度不同，含鈣的組織不能直接製作切片。一般骨組織含鈣量是最多的，除了骨組織之外，其它組織亦可發生鈣化，在組織中形成鈣化區，所以需要經過脫鈣過程。脫鈣是製作骨組織切片的重要環節，尤其是在進行免疫組織化學染色的骨組織，需要了解如何選擇合適的脫鈣液以及選在適當的時機，以下是目前市面上脫鈣液的成分：

Formic Acid (FA)

為最常見的脫鈣液，5%-20%在市面上皆可看到，用5%對於組織是相對溫和的。比起使用EDTA脫鈣更加來得迅速，但研究顯示若脫鈣時間太久可能會導致DNA被水解。

10% EDTA (pH7.4), or 10% EDTA/TRIS-HCl (pH 7.4), or 10% EDTA with 0.07% (w/v) Glycerol (pH 7.4)

此溶液的時間會比其他酸性溶液脫鈣時間來得長，並需要時常觀察脫鈣狀況，或更換新的溶液，但組織不易被破壞，IHC也比較容易染得出來。

5%-10% Nitric Acid in Distilled Water

這種脫鈣液成分可以有最短的脫鈣時間，但過程中會形成大氣泡進而破壞細胞，厚度為0.5mm的樣品可以在0.5-2hr完成(須取決於樣品大小)，完成後需要使用sodium sulfate終止脫鈣。

10% HCl in Distilled Water

脫鈣時間可以相當短，取決於樣品大小(室溫下可能需要2-6個小時或更長)，完成後需要使用sodium sulfate終止脫鈣。

一般來說，在選擇脫鈣液時會針對本身的需求去做選擇，例如：需要迅速脫鈣時，則可以選擇HCl成分的脫鈣液來進行實驗，但其風險就是會破壞組織，進而導致一些IHC無法呈色。