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24 2024.10

細胞程序降溫過程斷電怎麼辦?

冷凍保存中斷降溫:在 VIA Freeze 系統中受電力中斷影響的效應  
在冷凍保存過程中,降溫速度對細胞的長期存活率有著顯著的影響。降溫過快會導致細胞內形成致命的冰晶,因為細胞未能充分脫水;而降溫過慢則會過度脫水,並導致冷凍保護劑的積累,這對細胞有毒害作用。大多數細胞類型在冷凍過程中需要優化並控制的降溫速率。

為了在冷凍保存過程中保護細胞,控速降溫儀可確保冷凍方案準確且可重複執行。然而,與所有設備一樣,存在電力中斷的風險,無論是由電網問題、電壓突升、停電還是實驗室安全功能引發的。在電力中斷時,這類系統會進行未計劃但安全的關閉,並在恢復電力後重啟。VIA Freeze 系統是一種控速降溫儀,內含大量保溫材料,可保護樣品免受環境溫度的影響。

本研究旨在測試在不同冷凍過程階段中模擬電力中斷對 VIA Freeze 系統的熱效應及生物效應,並評估解凍後的細胞存活率。

一、冷凍保存過程中降溫中斷的熱效應
方法:使用 VIA Freeze 控速降溫儀以 1°C /分鐘的速率進行四次單獨的降溫運行。在 8 個 2 mL的冷凍小管中放置熱電偶,每管中含有 1 mL 10% (v/v) DMSO等滲鹽水溶液,以監控樣品溫度。在三次運行中,當溫度達到 -20°C、-40°C 或 -60°C 時模擬電力中斷。中斷 10 分鐘後,重新啟動系統並記錄溫度上升情況(表1)。第四次測試則直接至 -60°C,並無中斷保持該溫度。

結果

在 -20°C 時,由於樣品與環境溫度之間的差異較小,以及 VIA Freeze 系統內部組件的剩餘冷卻效果,未觀察到顯著的溫度上升。
在 -40°C 時,觀察到 1.3°C 的溫度波動,這低於通常在冷凍管中觀察到的成核事件(冰晶形成時的溫度突升)溫度波動,類似於在低溫下進行的“保持”步驟。這一程度的波動通常不會對細胞造成損害。
在 -60°C 時,觀察到 7.9°C 的較大溫度上升,這是由於系統關閉時的溫度與外部環境溫度之間的差異較大所致。然而,這一上升的趨勢相當於暴露在環境溫度中幾秒而已,與將樣品從控速降溫儀和低溫儲存設備之間轉移時的溫度變化相當,不太可能對細胞造成損害,關鍵在於冷凍管中的溫度仍低於細胞內玻璃轉變溫度,這意味著細胞內部依然處於固化狀態。

● 結論

研究結果顯示,即使發生電力中斷,VIA Freeze 系統仍能有效維持溫度控制,特別是在較低的冷凍溫度下。觀察到的溫度變化很小,不太可能對細胞造成損害,因為溫度波動始終處於安全範圍內。這表明,在適當使用 VIA Freeze 系統的情況下,短暫的電力中斷不會影響冷凍保存方案的有效性。

二、冷凍保存過程中電力中斷的細胞活性
為了測試電力中斷對細胞活性的影響,準備了20個冷凍小管,每個小管中含有 1 mL 3 × 10^6細胞/mL(Jurkat 細胞株-懸浮型人類免疫細胞),並在10% DMSO中以 1°C/分鐘的速率進行冷凍保存。進行了四次獨立的降溫運行,每次運行包含五個冷凍官。在三次運行中,當溫度分別達到 -20°C、-40°C 或 -60°C 時模擬電力中斷並持續 10 分鐘。第四次運行持續到 -60°C 且未發生中斷。

冷凍後,所有樣品都轉移到 -140°C 的低溫儲存中至少 24 小時。這些樣品使用自動乾燥解凍器進行解凍,並在正常條件下培養 24、48 和 72 小時。細胞存活率和增殖能力使用 Cytiva 的 Cytell 細胞成像系統進行測試(見圖2)。

結果
在任何測試的溫度點(-20°C、-40°C 或 -60°C)經歷電力中斷的樣品與未經歷中斷的對照樣品之間,解凍後的細胞存活率或增殖能力沒有顯著差異。這些結果與圖 1 和表 1 中的熱效應數據一致,顯示冷凍過程中的電力中斷對細胞存活或複製沒有不良的影響。

● 結論
本研究表明,使用 VIA Freeze 控速降溫儀在冷凍保存過程中,無論在任何階段出現 10 分鐘的電力中斷,對 Jurkat 細胞均無生物影響。為了增加對長時間停電的保護,可在主電源與控速降溫儀之間安裝不間斷電源(UPS),以提供備用電力,防止停電期間出現長時間關機的風險。

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