簡單慢病毒濃縮 人人都能輕鬆上手
慢病毒具有轉染效率高、可感染廣泛宿主細胞(如原代細胞)、攜帶較大基因片段、目標細胞專一性啟動(不同啟動子)等特性，常被用來作為特定基因的傳遞、細胞模型建立或疾病研究等工具，藉由將基因轉入整合到宿主細胞基因組內的方式，可結合RNAi的核酸干擾或者CRISPR/Cas9基因編輯技術，進行基因表達(Gene expression)、基因靜默(Gene silence)與基因編輯Gene editing等作用。
慢病毒的使用已廣泛應用在各個領域上，不管是學術的研究或者臨床治療上，都有許多相關研究被發表，如現在熱門的SARS-CoV-2研究，有研究團隊利用慢病毒建立可感染小鼠的Lentivirus-ACE2模型，讓人源SARS-CoV-2病毒可以感染小鼠肺上皮細胞，做為動物新冠肺炎疫苗開發的研究。另外也有研究團隊利用慢病毒作為腫瘤細胞標記，慢病毒載體選用腫瘤才會表現的聚合酶(encoding Pol2)與專一性的啟動子(FerH promoter)來啟動螢光(GFP)蛋白表現，作為腫瘤細胞追蹤與分離進行研究。
Lentivirus packaging system
Letivirus可藉由攜帶目標基因的lentivector與packaging system形成無致病性的pseudovirus，將有興趣的siRNA、shRNA、miRNA等嵌入宿主基因進行長時間表達。目前最常見的Lentivirus packaging屬於第三代的包覆系統(3rd generation)，主要由四個plasmid組成:
- Packaging plasmid: 主要進行病毒的結構的生成，包含 gag 與pol 基因，gag基因會做出病毒的外鞘蛋白；pol基因可做出病毒的複製酵素
- Envelope plasmid: 形成病毒套膜(Envelope)的VSV-G基因
- REV plasmid : 形成調控蛋白，進行RNA剪切與蛋白質運輸等表達調控的rev基因
- Transfer plasmid: 含有目標基因序列，5'LTR帶有一個異源啟動子(RSV)，能將目標序列嵌入到宿主基因內第三代慢病毒載體系統大幅提高安全性和減少形成具複製能力的逆轉錄病毒之風險。
如何有效率的濃縮病毒顆粒
TOOLSilent LentiPrecipating Reagent 是一種混合聚合物的產品，能夠針對慢病毒顆粒進行沉澱與濃縮，簡單的操作步驟，能在短時間內取的大量濃縮的病毒顆粒。
產品特色:
- 操作步驟簡單，只需混合即可。
- 無需超高速離心，一般高速離心機即可。
- 濃度增加高達 100 倍。
- 經濟高效的離心方法，可有效濃縮病毒。
- 無毒：對所有細胞株都非常安全，包括胚胎幹細胞(Embryonic stem cell)
圖爾思提供完整Lentivirus培養與分離產品
產品規格:
- TOOLSilent LentiBooster (VBT-KA00, 1ml)
- TOOLSilent LentiPrecipitating Reagent (VCT-KA00-100, 100 ml, VCT-KA00-250, 250 ml ,VCT-KA00-500, 500 ml)
- TOOLSilent Lentivirus Transduction Enricher (VT-KZ20-100, 100ml, VT-KZ20-500, 500ml)
Reference:
Jonghyuck Park, Joseph T. Decker, Dominique R. Smith, Brian J. Cummings, Aileen J. Anderson, Lonnie D. Shea , Reducing inflammation through delivery of lentivirus encoding for anti-inflammatory cytokines attenuates neuropathic pain after spinal cord injury. Corel (2018), doi:10.1016/j.jconrel.2018.10.003
A. Lamsfus-Calle, A. Daniel-Moreno, G. Ureña-Bailén, et al., Hematopoietic stem cell gene therapy: The optimal use of Lentivirus and gene editing approaches, Blood Reviews(2019), doi:10.1016/j.blre.2019.100641
Chi-Ping Day, John Carter, Carrie Bonomi, Dominic Esposito, Bruce Crise, Betty Ortiz-Conde, Melinda Hollingshead, and Glenn Merlino, Lentivirus-mediated bifunctional cell labeling for in vivo melanoma study, Pigment Cell Melanoma Res. (2009), doi: 10.1111/j.1755-148X.2009.00545.x
