ELISA樣品稀釋倍數如何決定

當實驗室利用ELISA檢測技術進行一個不熟悉樣品的濃度檢測時，首先，你必須先確定樣品中目標蛋白質的濃度是否介於 ELISA 標準曲線的最高濃度到最低濃度的範圍之間，當樣品中目標蛋白質的濃度超出 ELISA 實驗的標準曲線(standard curve)時則無法精確地使用內插法計算其濃度，因此在一開始進行 ELISA 實驗時最重要的步驟就是先決定樣品是否需要進行稀釋或是思考樣品的稀釋倍數，以確保樣品中目標蛋白質的濃度介於標準曲線(standard curve)的可偵測範圍內。圖爾思在承接客戶的專案時常常遇到有關樣品稀釋的相關問題，因此這篇文章中將會就著圖爾思的檢測規範給大家進行 ELISA 實驗時一個參考的建議，希望大家最終都能順利的把檢測數值準確地插入標準曲線區間中順利的得到精準與正確的實驗數據。

首先，在進行 ELISA 實驗前，你必須先收集相關文獻並查詢你要測定的目標蛋白質在該樣品中大約會落在怎樣的濃度區間，還要思考自己的樣品跟文獻中提到的是否有差異，確定完成後接著就應該比對您購買的 ELISA kit 的可檢測濃度範圍是否符合您樣品的濃度，接著，就可以將樣品濃度稀釋到該 ELISA kit 標準曲線的中段區域然後開始進行 ELISA 實驗了。

說到這邊讀者的疑惑一定是：我就是不知道目標蛋白質的濃度才要測啊 ! 如果都知道了還測什麼OOXX？如果心中有這樣的聲音出現，我們建議您可以拿原始樣本(前提是樣品體積是足夠的)直接先進行第一次的測定，因為通常商品化 ELISA kit 可偵測的濃度範圍通常會是在該樣本常態下會出現的濃度區間；但若樣品體積不夠或是非常珍貴時，一般我們會建議先將樣品稀釋10～100倍先嘗試進行一次前測試實驗(pre-test)，此時若測量出來的數值在標準曲線最小濃度以下，就代表原始樣品中目標蛋白質的量非常低，此時則必須思考收集足夠的原液不稀釋再做一次測試或是選擇偵測靈敏度更高的 ELISA kit。

最後就是選對 ELISA kit 與用在適合該 ELISA kit 的樣品上面，這通常發生的狀況是樣品目標蛋白質的最低濃度無法被偵測出來，這並不表示 ELISA kit 的效能不好，而是你選擇了不適合的 ELISA kit，例如：人類正常人血清中 TNF-α 濃度通常小於 8.1pg/ml，但您卻偏偏選擇了標準曲線最低可偵測濃度只有 20pg/ml 的 ELISA kit 來進行實驗，就好像我們選擇林志玲做為我們追求的對象，通常注定失敗(除非你是日本明星)，如此一來當然是無法得到好的實驗結果。這邊要重申，世界上沒有最棒的產品，只有最適合你的產品。世界上沒有千千萬萬個林志玲，只有屬於你自己的林志玲。

另外，樣品經過適度的稀釋後對於 ELISA 實驗偵測出來的濃度數據會是比較可信的，因為例如：血清或血漿這類的樣品成分非常複雜，裡面有些成分會使抗體辨識目標蛋白的能力降低，而稀釋後則可以將此效應降低，這就是為什麼有的時候實驗前測試會發現原始樣品偵測出來的濃度可能遠低於稀釋10倍甚至100倍的樣品濃度來的低。

以上細節希望能幫助您在 ELISA 實驗上能次次都成功，把把都胡牌。
 
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