技術分享-不藏私！組織切片技巧大公開

組織免疫染色(IHC)是一個常見的生物技術之一，之前已經有跟大家分享過如何把組織免疫染色(IHC)做好，然而，進行組織免疫染色(IHC)前的切片步驟其實也是相當重要，好的組織切片上天堂，不好的組織切片住套房就是這個意思。今天就和大家分享組織切片該注意的事項與小技巧一起帶著大家上天堂，這些技巧可是圖爾思的資深組織切片人員多年的小秘訣喔～

組織包埋前處理:

首先，先確定組織包埋的方向及角度或位置是不是你研究的目標所在，這必須在包埋前就先決定好，決定最大切片面積以及組織特定切面，然後將組織塊以最適合的角度包埋得宜以避免在上切片機時還要多次調整切片角度。若組織樣品取得後發現並非平整，則必須在包埋前先做好修整的工作，否則不平整面的組織塊會拉長切片工作距離才能得到適合的切片，這樣除了浪費時間也耗損了寶貴的樣本。

石蠟切片前置工作及進行:

包埋後的蠟塊樣本通常保存於室溫即可，在切片前一晚可以將蠟塊放置於-20度的冷凍櫃中預冷，這步驟會讓蠟塊質地較硬，切片刀可以手起刀落俐落地將石蠟樣品一片一片的切下來；在切片過程中若觀察到蠟塊切面有皺折的現象而造成切片不順時，可以對著蠟塊哈口氣後再繼續切，這個小技巧可以改善切片的流暢度與平整。另外穩定不猶豫及有節奏的轉動切片輪可以流暢連續的將石蠟切片切成一連續長條。另外，切片前的粗切可以設定20 μm的切片厚度，快速而穩定地將不需要的部分去除；當粗切完成進入到細切步驟後，可以設定4 μm的厚度進行，但還是要看研究所需觀察組織進行微調。如果覺得厚度太薄觀察到組織切面會零零碎碎的，會建議把厚度提高一些，會比起薄切的完整。
 

展片及烘片的小技巧:

石蠟樣品切片下來會形成藕斷絲連狀連續長條，這時需要做展片的步驟。展片時需要兩盆不同溫度的水，一盆是水溫較涼的水（自來水打開即可取用），另一盆為(39-42度左右)，由水溫低的先將切下來的組織，慢慢展開，這個時候有出現氣泡或是皺摺可以在這個時候做展開跟去除的動作，我們可以使用水彩筆，毛筆，迴紋針，報紙，鑷子…等等將組織作展片，接著把組織移到玻片上，再放入溫度較高的水中，利用較高溫度讓有皺摺的部分可以完全展開，最後將玻片垂直放入水中後緩緩將切片拖離水面黏在玻片上。需要注意的是氣泡若有在組織上面，盡可能地去除，除此之外，玻片通常會殘留水分，需把多餘的水分以擦手紙初步吸收，再放置於烤片機上以攝氏37度緩緩地將殘存水分蒸發，切片貼附於玻片會很平整。若遇到容易掉片的狀況，可以烤片烤久一點。烤片時間一般會至少隔天才會把玻片收起來，不然也會容易掉片，至於時間太長不會有太大的影響。最後可以將玻片整理於玻片盒中待後續染色使用。

看完了以上關於IHC切片的小技巧後是不是覺得小細節大關鍵呢！其實，以上的技巧也是圖爾思技術服務中心資深研究員能把IHC技術服務做得這麼好的原因。
 
更多圖爾思組織包埋切片染色掃片判讀技術服務請點我
更多技術分享請點我