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27 2019.06

細胞轉染(transfection)技術深度探討

將核酸以物理或是化學方式送入細胞的方式稱為細胞轉染(transfection),轉染的目的是期待所送入大量的外源核酸達到過度表現或是抑制細胞內源性的基因表現,為生命科學研究常常使用生物技術之一。

 

轉染技術(transfection)從最早的磷酸鈣共同沉澱法發展到目前常見的脂質體(liposome)及陽離子聚合物(cationic polymer),其目的皆利用其分子特性將核酸攜帶入細胞中。至於哪種轉染試劑最好?首先,我們要了解的是並非一種轉染方式或試劑可以轉染所有的細胞株,因此並沒有所謂好或不好的轉染試劑,就跟選擇男女朋友一樣,只有適不適合,只要各方面都契合就是天作之合,所以當轉染效率不彰時,除了調整試劑與核酸的混合比例外,轉換不同轉染機制的試劑或許是一個解脫的辦法。

 

脂質體類轉染試劑(liposome transfectoin reagent)在進行實驗時,要特別注意細胞數量一定要達到其建議量,通常是80%以上的滿盤度,因為其試劑的添加的量就是針對等量的細胞所設計,若實驗當下細胞不足其建議量,但一定非得往下做(如細胞來源珍貴等等),圖爾思SuperLab建議這時候可將細胞轉移到較小面積的孔盤;若是無法轉移,可以選擇依比例減少脂質體類轉染試劑(liposome transfectoin reagent)及核酸的使用量達成目的。過多的脂質體類轉染試劑(liposome transfectoin reagent)通常是造成細胞在轉染過程死亡的主要原因,請勿認為增加用量就會得到較好的轉染效率。

 

陽離子聚合物轉染試劑(cationic polymer transfection reagent)在使用限制上除了比脂質體類轉染試劑(liposome transfectoin reagent)少了胎牛血清及抗生素的影響外,造成細胞轉染後死亡的比例也較低,換句話說一般而言陽離子聚合物轉染試劑(cationic polymer transfection reagent)的細胞毒性較低,主要原因是在於陽離子聚合物轉染試劑(cationic polymer transfection reagent)與核酸結合後是藉由細胞本身的吞噬小體送入細胞與微脂體融合細胞膜後送入細胞的方式較為溫和;而陽離子聚合物轉染試劑(cationic polymer transfection reagent)還有個優點是可適用懸浮性細胞的轉染,因為這個優點,貼附性細胞在繼代後就可以馬上進行轉染實驗。使用這類型的轉染試劑時務必依照廠商的說明書上的建議操作方法與用量進行轉染實驗,這是因為其形成的多聚物(polyplex)體積大小是大部分細胞進行吞噬作用時最佳的大小,換句話說當發現實驗用的細胞株並無法達到較佳的效果就需要調整兩者的比例形成不同大小的多聚物以測試對單一種細胞株轉染的效率,這對使用非常見細胞株的使用者來說是個必要的過程。

 

最後不論使用何種轉染方法,使用的細胞株必須處於健康的狀態,剛解凍的細胞需要繼代數代後確認其形態及生長曲線是否為正常,不健康的細胞株是沒有辦法進行轉染實驗的,因此細胞健康程度也是要得到較佳轉染效率的一個需要注意的地方。
 

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