17 2019．04

如何使用CCK-8檢測細胞增生與毒性

細胞增生(cell proliferation)檢測與細胞毒性(cytotoxicity)偵測是生命科學研究中常常被使用的一門生物技術。而在眾多的檢測方法中目前最主流的方式為使用CCK-8試劑盒來進行檢測。在這邊會和大家說明CCK-8的作用原理(如下圖)與進行CCK-8應該要注意的事項。

CCK-8試劑盒裡面最主要的成分為WST-8，WST-8與傳統的WST-1、MTT、MTS、XTT相比對於細胞的毒性更低、靈敏度更高、水溶性強且更易於保存，當細胞增生(cell proliferation)時粒腺體中的脫氫脢會將WST-8還原成黃色的formazan dye，細胞增生(cell proliferation)越多formazan dye就會形成越多，黃色就會更明顯與更深，然後經過分光光度器的量化分析得到細胞增生(cell proliferation)的數值。CCK-8方法的優點總結如下：

操作方法簡單、檢測時間短
靈敏度相較傳統方法更為精準，因此細胞密度低也適用
WST-8產生的formazan dye為水溶性不需要再用DMSO等其他有機溶劑進行溶解而產生數據誤差
CCK-8對於細胞的毒性非常低，因此可以細胞可以重複進行偵測
CCK-8試劑盒裡面的成分單純，檢測前不需要預先配置
偵測成本低

綜合以上的優點，CCK-8已經成為主流用來進行細胞增生(cell proliferation)與細胞毒性(cytotoxicity)檢測的最佳工具之一。雖然CCK-8的操作方法非常簡單，但進行檢測時仍然必須注意下面事項：

若樣品中的物質具有氧化性或是還原性的話，加入CCK-8前建議先更換培養基(medium)再進行測量
使用96孔細胞培養盤進行檢測時，貼附細胞每個孔洞的細胞數建議不要少於1000顆/孔，另外，若您偵測的細胞為白血球，建議每個孔洞的細胞不要低於2500顆/孔
phenol 與血清並不會造成數據的不準確，只要扣除背景值即可，不需要特別去除
CCK-8可以偵測E. coli. 因此進行檢測前請確認樣品中沒有E. coli.的污染
金屬成分會影響CCK-8的偵測，因此也必須要特別留意
懸浮細胞檢測難度較高，因此使用CCK-8進行檢測時必須要提高細胞數量與延長細胞培養的時間
若細胞培養時間較長，加入CCK-8前請務必確認培養基(medium)是否已經變色，若已經變色請更換新鮮的培養基(medium)再進行檢測
樣品進入分光光度計前請確認孔洞中沒有氣泡，氣泡會影響儀器的分析進而干擾實驗數據

以上，為一般在使用CCK-8時常見的問題與應該要特別注意的事項。

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2019．04．17