你不可不知的新型細胞活性檢測試劑 –TOOLS CCK-8操作方式及應用
在細胞培養實驗過程中，大家是不是總會好奇別人家的實驗總是做的又快又好，而自己做的實驗又慢又難得做出自己滿意的結果?
其實，有時候並不是自己不努力，只是沒有找對方法。做實驗可不能光是埋頭苦幹，還要學會運用合適的檢測試劑盒，這樣就能事半功倍。
如果你還在用MTT，那就真的是沒有效率了．MTT花4小時才能得到的結果，而TOOLS Cell Counting (CCK-8) kit只需1小時，還可以應用於細胞生長和毒性分析，不僅如此，TOOLS Cell Counting (CCK-8) kit 對細胞的毒性極小，完全可以測完細胞生長或藥物毒性後再繼續用細胞進行下游實驗。下面就來為大家介紹一下TOOLS CCK-8的原理以及應用。
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TOOLS CCK-8基本原理
TOOLS CCK-8試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞生長和毒性分析。
WST-8作用機制
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TOOLS CCK-8產品應用
藥物篩選、細胞生長測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏感性試驗。
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TOOLS CCK-8與其它細胞生長測定試劑比較
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TOOLS CCK-8與MTT法之實驗數據比較
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注意事項
- 第一次做實驗時，建議先利用幾個well試做。
- 加入細胞時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉澱下來，導致每個well中的細胞數量不一致。
- 96孔盤周圍一圈的well其medium容易揮發，為減少誤差，建議96孔盤周圍的四邊每孔只加medium only。
- 建議採用八爪微量吸管，減少平行間的誤差，加TOOLS CCK-8時，建議斜貼著well加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，干擾OD值。
- 若細胞培養時間較長，培養基顏色或PH發生變化，建議更換培養基後再加TOOLS CCK-8,含有酚紅的培養基不影響測定。
- TOOLS CCK-8對細胞的毒性非常低，其他的實驗，例如中性紅法或結晶紫法，也可在TOOLS CCK- 8法檢測完後繼續進行。
- 可以使用大於600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。
- 如果實驗中待測物質有氧化還原劑，在不含細胞的培養基中加入藥物，然後加入Tools CCK- 8試劑在一定時間內檢測，和不加藥物的培養基進行比較(只加Tools CCK -8試劑)，如果OD值明顯偏高，則說明有藥物與試劑的反應。
- 加TOOLS CCK-8試劑時速度要快，減少試劑在移液器上的殘留，加入TOOLS CCK-8試劑後輕輕震96-孔盤，為了避免加樣本時由於TOOLS CCK-8殘留在微量吸管上所帶來的誤差，可以在加樣本前用培養液稀釋TOOLS CCK-8試劑並混勻後加樣本。
- TOOLS CCK-8反覆解凍會增加背景值，干擾實驗測定以及數據。
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Q&A
Q：TOOLS CCK-8的保存和穩定性如何？
A：TOOLS CCK-8穩定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經常使用建議4℃保存，避免反覆解凍。TOOLS CCK-8正常顏色為粉紅色，若顏色發生明顯偏差，建議洽詢專員。
Q：Tools CCK-8會對活細胞進行染色嗎？
A：不會，首先WST-8不會進入細胞染色，整個顯色反應都是在培養體系中進行的。另外WST和WST-8甲臢都屬於高度水溶性組分，反應結束更換新的培養液，即可清除外源成分。
Q：在加入TOOLS CCK-8時可否不更換培養基？
A：一般情況下可以不更換培養基。但是如果培養基里有氧化還原性物質的話，有可能會產生誤差，必須更換其它培養基。
Q：若是使用6 well或者24 well plate 進行試驗，TOOLS CCK-8試劑使用量怎麼樣呢？
A：如果要使用6 well或24 well plate 進行實驗，請先計算每個well應的細胞量，並按照每個well培養基總體積的10%加入Tools CCK-8溶液。
Q：能否用384 well-plate 進行細胞生長與活性檢測的實驗呢？
A：可以，TOOLS CCK-8產品的使用量為每孔培養基總體積的10%。建議先將TOOLS CCK-8產品稀釋一倍，然後加入培養基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。
Q：只可以在450 nm波長處測OD值嗎？
A：可以在450 nm波長處測OD值，但是若無此波長的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度最高。
Q：若是暫時不檢測OD值，該如何處理？
A：若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，並遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化
Q：在實驗中OD值太高，怎麼解決？
A：可以縮短加入Tools CCK-8後的培養時間。例如：可以把加入CTools CK-8試劑後的培養時間由2小時縮短為1小時。此外，可適當減少細胞的數量。
Q：如果OD值太低，怎麼解決？
A：可以採取2個辦法：1、適當增加細胞數量 2、延長加入CCK-8試劑後的反應時間。
Q：應該每次做標準曲線嗎？
A：建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態不一定一樣。對於狀態不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。
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TOOLS Cell Counting (CCK-8) kit 特色
- 產品僅1管試劑，操作簡單方便
- 細胞毒性低
- 高靈敏度
- 可應用於多種細胞檢測
- Data重複性高
