組織包埋切片染色(IHC)實驗技術最佳化 Section2

圖爾思技術服務中心一直是組織包埋切片染色(IHC)技術服務的專業委外廠商，我們於此領域的經驗相當豐富，博士級的團隊能提供全方位的IHC解決方案，也是各大研究單位與生技公司的最佳合作夥伴。繼上一篇 "如何進行組織包埋切片染色實驗最佳化" 後今天我們會為大家從抗體的角度出發更深入探索IHC實驗中常遇到的問題並提出我們的解決方案，首先，要跟大家說明的是因為蛋白質結構、蛋白質表達量與蛋白質性質在各種樣本與各種條件下的複雜狀況，因此IHC並沒有一個實驗條件的標準化方法，因此在進行IHC實驗時 "細節" 是能否把IHC實驗最佳化最重要的要素，因此圖爾思基於豐富的IHC技術服務經驗與客製化抗體生產商的角度提出把IHC實驗做好的六的細節：

1. 把組織樣品固定做好：組織固定的目的在於保存和保護組織與抗原，好的固定一方面可以維持組織的硬度與保持組織的型態，另一方面就是防止目標蛋白質變性進而保持抗原不被破壞或是變性。

2. 抗原的修復(retrieval) : 當組織樣品被固定後，由於蛋白質與甲醛會發生交互作用，因此抗原的結合位置可能會被遮蓋進而導致IHC染色結果不佳，此時可以嘗試進行retrieval的步驟讓抗原重新露出且此步驟也不會破壞抗原的性質，那你一定會問我們，到底要不要進行retrieval? 一般來說，經過石蠟包埋的組織均需要進行retrieval來使抗原露出提高抗體辨識度。

3. 要如何選擇retrieval的方式？常見的retrieval方法有高壓熱修復、微波熱修復與胰蛋白脢這三種，而熱修復法的緩衝液主要可以用Tris-EDTA(pH 9.0)或是檸檬酸鈉(pH6.0 )。根據我們的經驗，我們比較建議用高壓熱修復法，因為此法的操作方式簡單，效果也比另外兩種好 ; 對於大多數抗體來說，通常使用 Tris-EDTA(pH9.0) 的效果為佳。

4. 要如何調整抗體的稀釋倍數？選用一支適合IHC的抗體當然是首要的重點，在上一篇我們也已經告訴各位要如何挑選一支好的IHC抗體。每種組織或是樣品中的蛋白質表達量以及每間公司抗體與抗原結合力也不同，因此抗體的稀釋倍數最好是依照廠商的抗體說明書為準，因為通常一支好的IHC抗體說明書上絕對會詳細的標示IHC的條件，接下來最好的方式是挑選一個陽性對照組先做前測試然後在依照實際狀況進行稀釋倍數的調整。

5. 如何增強IHC染色效果？一般來說在IHC染色中我們最常使用的呈色劑為DAB，DAB氧化後會形成棕色的物質，我們就是依據此棕色物質來判定IHC的結果與位置。當DAB呈色不明顯或是染色時間超過10分鐘才出現顏色，這時我們可以添加硫酸銅溶液去增強IHC染色的呈色結果，這是因為DAB的氧化物能與銅離子反應生成顏色更深的棕黑色物質，所以可以增強染色的效果。

6. 如何判斷我的IHC實驗成功與否？一般來說進行IHC染色實驗時最好能取得陽性和陰性對照組，陽性對照組用來判定可以用來判定假陰性，陰性對照組則用來判定假陽性，但若不能取得對照組樣品時我們也可以在網頁上搜尋該樣品使用該抗體時所呈現的IHC結果，或是尋找相關文獻。如此一來，才能做出最客觀的實驗數據。

以上，只要做好上述六點絕對可以幫助您做出最棒的IHC實驗！
圖爾思技術服務中心絕對是您IHC實驗最佳的好夥伴～