磷酸酶(phosphatase)在Western Blot磷酸化研究中扮演的重要角色

蛋白質的磷酸化(phosphorylation)和去磷酸化(dephasphorylation)是訊號傳遞過程中非常重要的過程，蛋白質的磷酸化(phosphorylation)是由 protein kinase 進行，而去磷酸化(dephasphorylation) 則是由 phosphatase 執行，當我們利用 Western Blot(WB) 來進行蛋白質磷酸化研究與判定時在 SDS-PAGE 上預測的分子量大小的位置通常會出現兩條離很近的 band，這個時候其中一條很有可能就是磷酸化(phosphorylation)的蛋白質，那到底要如何驗證呢？圖爾思來告訴大家一個最簡單的方法，我們只要透過 phosphatase 處理就可以初步簡單的判斷了，如果樣品透過 phosphatase 的處理後在 Western Blot(WB)的結果發現分子量較大的 band 訊號消失或是減弱了則表示這個 band 就是該蛋白質磷酸化(phosphorylation)的最佳證明了。而身為最佳技術服務商以及抗體代理商的我們也常常使用這個方法來進行技術服務或是驗證磷酸化抗體的效能喔～是不是很簡單呢？

另外，在進行 Western Blot(WB) 的實驗時，經常會遇到很多的蛋白質(特別是膜蛋白質, membrane protein) 的訊號比預期的分子量高出很多，這個現象往往可以猜測有可能是目標蛋白質發生醣化修飾(glycosylation)所造成的結果，如果卡到了，我們可以使用分析軟體或是查詢數據庫來看看目標蛋白質醣化修飾(glycosylation) 的狀況與預測分子量大小，當然科學家總是喜歡眼見為憑，所以更進一步我們也可以利用 glycoside hydrolase 用與上述檢測磷酸化蛋白質的方法來進行判斷，但是相較 phosphatase，glycoside hydrolase 處理後的結果可能會比較複雜，因此需要更多輔助方法來進行判斷。圖爾思SuperLab最喜歡帶大家插入並且提供問題的簡單解決方法，我們下次見囉～

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