環球生技月刊報導|胞外體學會/ 圖爾思/ 工研院 揭秘胞外體製造「眉角」胞外體前景看翹！

5 月28 日，由圖爾思生技及台灣胞外體學會共同舉辦的主題研討會「疾泌- 發掘胞外體的潛在力量」中，邀請臺灣大學植物病理與微生物學系教授沈湯龍、工研院生醫所研究員劉振凰和謝惠珠，以及圖爾思的代表，分享了胞外體的研究歷史和應用，展現了這項細胞材料在醫療領域的強大潛力。

台灣胞外體學會理事長周涵怡首先致詞表示，胞外體是近年在經科學強力研究下，有望快速產生臨床或美容應用的領域，現在也是胞外體相關研究和應用正要起飛的時刻。

圖爾思董事長楊志偉表示， 胞外體相關應用的市場持續成長，2023 年全球市場達2.3 億美元，2028 年可望達到13 億美元，全球也有140 個胞外體相關產品正在臨床階段或已經進入臨床。

楊志偉分享，圖爾思擅長生命科學的基因、蛋白質、代謝物的分析與鑑定，這兩年投入外泌體的品質控管與內容物的分析服務，期待與產學界持續探索這項藍海領域。

奈米大小胞外體盼成疾病診斷、治療新星

臺大植微系教授，也是台灣胞外體學會創會前理事長的沈湯龍，首先詳細介紹了胞外體的發現過程。他表示，外泌體為生物細胞自然產生的囊泡，具雙層磷脂質，大小為約為30-150 奈米。

沈湯龍表示，約1980 年代，科學家首次以Exosome 來描述這項細胞外囊泡(ExtracellularVesicles)，且發現其宛如細胞的「垃圾袋」，幫忙打包細胞內的廢物。直到2007 年，瑞典科學家發現胞外體會在癌細胞之間，用以傳遞mRNA、miRNA 等核酸物質。隨後科學家逐步確定生物細胞會透胞外體與細胞外環境聯繫、作為彼此溝通的「語言」。

沈湯龍團隊自身的研究也發現，胞外體會幫助癌轉移的器官趨向性，經由帶有不同細胞附著因子(Integrin)，能將胞外體導航到特定組織或器官，改變該部位的環境而使癌細胞更容易存活。

他也簡介，胞外體可望成為生物標記、作為療法，或是成為藥物傳輸系統來搭載藥物，甚至直接成為能誘發免疫反應的疫苗。

不過，目前胞外體相關法規環境仍剛起步建構中，尤其人源外泌體應用規範在全球皆較嚴格，臺灣也甫於今年3 月公布，人源外泌體化粧品經個案審查通過後可開放使用。
 

胞外體核酸藏秘密！工研院開發高靈敏癌症分子監測

工研院劉振凰博士表示，液態生物檢體(Liquid Biopsy)在癌症應用的市場快速成長中，目前市面上的產品以偵測游離核酸(cfDNA) 為主，胞外體則是後起之秀。

以工研院在肺癌的循環腫瘤核酸(ctDNA) 檢測開發經驗而言，ctDNA 含量低到無法實際應用於復發監控或用藥策略選擇，此外，ctDNA 檢測也不適用所有癌症類型，並且無法即時反應腫瘤變化。

因此，工研院改為開發「多重循環核酸」檢測，藉由同時分析循環腫瘤核酸與胞外體核酸( 包含DNA 和多種RNA)，能比僅檢測cfDNA 提高將近10 倍的檢測靈敏度。由於腫瘤胞外體源自腫瘤細胞無間斷的釋放，還能夠即時反應腫瘤變化。

工研院也開發了多重循環核酸的保存技術，確保全血樣品在常溫下，胞外體核酸超過14 天不被降解；以及開發多重循環核酸的純化技術，利用磁珠分離材料一次將所有核酸純化。

工研院自去年開始與臺大醫院新竹分院合作，進一步開發大腸癌高靈敏度分子檢測，用於早期轉移和復發監測，目前已有患者術後追蹤達6 個月。

建立細胞材料重點步驟：選擇來源、建細胞庫、凍存、品管

圖爾思生物科技儀器部業務專員李明駿，分享了在開發胞外體之初，如何建立起穩定的細胞材料。
李明駿表示，胞外體的用途和適應症，與其來源、培養方式等皆息息相關，例如不同組織來源間質幹細胞(MSC) 所產生的胞外體，或是不同免疫細胞產生的胞外體等，都可對應到不同適應症。而細胞培養過程中，包括培養方式為2D 或3D，或
培養時的養分補充、繼代、收穫方式等，都會影響到胞外體。
李明駿表示，細胞來源的選擇、培養條件優化、建立穩定細胞庫並定期更新、嚴格的細胞培養操作、測試和品質控制等，是開發細胞材料的重點。
「因此，在開發胞外體的細胞材料時，需先找出合適的親代細胞和穩定的細胞培養環境，進而建立細胞庫、找到凍存參數、分層凍存、品質管控、符合法規要求，即能製造出符合所需的細胞。」李明駿說。

他也詳細說明了以上步驟的細節，例如選定細胞來源時，若選用同種異體的初代細胞，則需確認最終產品的胞外體能否維持品質一致；源自誘導性多功能幹細胞(iPS)/ 胚胎幹細胞(ES)、株化細胞，就需進一步建立主細胞庫 (MCB) 及生產用細胞庫(WCB)，且需定期確認體外培養細胞年齡(LIVCA)。

而圖爾思代理的Cytiva VIA Freeze 免液態氮程序降溫儀可以提供符合GMP 及21 CFR part11 的穩定降溫平台；Beckman Coulter 的Vi-CELL BLU細胞活性分析儀則可透過自動化的細胞計數，最大程度減少人為操作的誤差，以確保細胞凍管的一致性。
 

胞外體製備除了拚產率更要注意批次再現性

工研院謝惠珠博士表示，胞外體製劑開發充滿挑戰，從一開始細胞源的選擇、細胞前處理、細胞培養、胞外體純化到品質分析，每個環節都涉及到非常多而複雜的選項。不過，在此之前，最重要的是先決定適應症與胞外體的用途，才能選擇最適合的製備與分析方法。

謝惠珠舉例，製備方法包括以未經改造的天然細胞分泌胞外體；以細胞激素、生長因子、化合物或超音波等刺激細胞，促使細胞分泌更大量的胞外體；透過基因改造細胞，製造帶有特定表面蛋白或帶有特定mRNA 的胞外體；以及將胞外體額外添
加生物分子或藥物等。謝惠珠也提醒，特殊的誘導與培養條件可能提高胞外體的產率和活性，不過，也需注意是否產生副作用，以及是否能維持批次的再現性。

至於胞外體的純化技術也有很多種，謝惠珠表示，沒有所謂最完美的選擇，應依據自身對於純度、回收率、結構完整性、通量、GMP 相容性等的需求來評估純化策略。

工研院則自主開發出結合大小排除層析(SEC)和切向流過濾(TFF) 的分離技術，可達到良好的回收率，製造高純度胞外體。

確保胞外體安全、有效功能性/ 功效性試驗不可缺

圖爾思生命科學部產品副理蕭楹澄，分享了多項胞外體開發時，為驗證其實際療效，可進行的功能性與功效性試驗。
蕭楹澄表示，近年胞外體的臨床開發越來越廣泛，擴及癌症，甚至骨科、異位性皮膚炎、乾眼症等新領域；而臨床開發時，後續的功能性測試，就是驗證胞外體能否用於目標適應症的重要過程。
在品質監控檢測項目上，圖爾思提供包括：表面蛋白表現檢測，也針對胞外體提供各項身份鑑定/ 純度分析，例如：蛋白質純度、粒徑、濃度等，此外也包括多種雜質分析、安定性測試、功能性分析( 如：蛋白質、核酸、脂質等分析)。

蕭楹澄表示，圖爾思可提供一站式的整體分析服務，甚至後端的動物實驗也能協助。其在動物實驗方面，已建立包括異位性皮膚炎、類風濕性關節炎、痛風、毛髮再生、非酒精性脂肪肝、褥瘡、肌少症等動物模型可供使用。

亞洲首台CytoFLEX nano demo unit進駐圖爾思示範實驗室

研討會中，主辦單位也宣布，圖爾思在和美商貝克曼合作下，已將貝克曼旗下最新流式細胞儀⸺全亞洲首台CytoFLEX nano demo unit，進駐到圖爾思的示範實驗室(Demo Lab)。
美商貝克曼庫爾特臺灣分公司生命科學部行銷經理蔡孟君，分享了貝克曼適合用於胞外體開發的最新流式細胞儀。

她表示，貝克曼是首家將敏銳、小體積的雪崩光電二極體(APD) 偵測器放入流式細胞儀的公司，他們今年最新推出的機型CytoFLEX nano，最小可偵測到40 奈米的粒子、同時染6 個螢光，並且可看5 個側向散射光(Side Scatter)，更將MIFlow-
Cyt-EV Guidelines 標準化放入機器中，幫助研發人員更明確偵測到胞外體狀態。

蔡孟君也特別強調，有5 個側向散射光功能上，能以雷射從更多不同角度照射構型各異的胞外體，可有效幫助找出特別構型的胞外體。

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轉發報導/環球生技 巫芝岳、劉馨香